本发明提供一种从发酵液中提取截短侧耳素的方法。该方法通过甲醇或乙醇在升温条件下先将发酵液中的截短侧耳素菌体进行溶解，然后直接用甲基叔丁基醚提取出来。相对于现有技术中采用过滤获得湿菌体来提取截短侧耳素的方法，本发明实现了一步操作，省去了过滤、干燥、碾碎等繁琐的步骤，简化了工艺过程，同时也避免了滤液中截短侧耳素的流失。而且，本发明所采用的试剂便宜易得，生产成本低。
1.一种从发酵液中提取截短侧耳素的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）采用菌种发酵法制备截短侧耳素，获得发酵液；2）向所述发酵液中加入甲醇或乙醇，获得混合发酵液，所述发酵液与甲醇或乙醇的体积比为5～25∶1；3）向步骤2）获得的混合发酵液中加入甲基叔丁基醚，所述混合发酵液与甲基叔丁基醚的体积比为2～20∶1，升温至30℃～55℃，搅拌后分离出溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚；4）将步骤3）中所述溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚在-0.06～-0.08MPa、40℃～50℃下浓缩，得到浓缩液；5）把步骤4）所获得的浓缩液降温至5℃～15℃，结晶分离出截短侧耳素。
2.根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取截短侧耳素的方法，其特征在于：步骤2）中，所述发酵液和甲醇的体积比为10∶1。
3.根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取截短侧耳素的方法，其特征在于：步骤3）中，所述混合发酵液与甲基叔丁基醚的体积比为5∶1。技术领域
本发明涉及菌种发酵法制备截短侧耳素的分离提取技术。
背景技术
截短侧耳素是由侧耳菌产生的一类广谱抗生素，主要用于家禽和家畜的饲料添加剂，能有效多种传染病。同时截短侧耳素的衍生物泰妙菌素也是世界十大兽用抗生素之一。菌种发酵是制备截短侧耳素的重要方法，目前，从发酵所得产物中提取所得截短侧耳素的主要方法是，将发酵产物过滤，收集湿菌体，然后干燥得到干菌丝，再利用乙酸丁酯、甲醇、乙醇或甲基异丁基甲酮浸提所得，如专利：200510122954.0、201010180181.2、200910073722.9等。此类方法过滤后直接将滤液丢弃，会导致在滤液中含有的部分截短侧耳素损失掉，并且所得产物的纯度不高。专利200510122952.1采用了将过滤所得菌体和滤液分别处理的方法来提高截短侧耳素收率。此方法仍然保留了过滤的操作步骤，而且，对滤液的处理需要用到专用设备，其过程繁琐、生产成本高的缺点。
发明内容
本发明的目的是提供一种不需要过滤，直接从菌种发酵制备截短侧耳素的发酵产物中提取截短侧耳素的方法。为实现本发明目的而采用的技术方案是这样的，一种从发酵液中提取截短侧耳素的方法，包括以下步骤：1）采用菌种发酵法制备截短侧耳素，获得发酵液；2）向所述发酵液中加入甲醇或乙醇，获得混合发酵液，所述发酵液与甲醇或乙醇的体积比为5～25∶1；3）向步骤2）获得的混合发酵液中加入甲基叔丁基醚，所述混合发酵液与甲基叔丁基醚的体积比为2～20∶1，升温至30℃～55℃，搅拌后分离出溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚；4）将步骤3）中所述溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚在-0.06～-0.08MPa、40℃～50℃下浓缩，得到浓缩液；5）把步骤4）所获得的浓缩液降温至5℃～15℃，结晶分离出截短侧耳素。本发明通过甲醇或乙醇在升温条件下先将发酵液中的截短侧耳素菌体进行溶解，然后直接用甲基叔丁基醚提取出来，其技术效果是毋庸置疑的。相对于现有技术中采用过滤获得湿菌体来提取截短侧耳素的方法，本发明实现了一步操作，省去了过滤、干燥、碾碎等繁琐的步骤，简化了工艺过程，同时也避免了滤液中截短侧耳素的流失。相对于现有技术中将滤液和湿菌体分别处理的方法，本发明省去了过滤和对滤液处理的繁琐操作，降低了生产成本。更重要的是，本发明采用无毒试剂，无有害物质排放，污染小，无浪费。本发明所采用的试剂便宜易得，生产成本低。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但不应该理解为本发明上述主题范围仅限于下述实施例。在不脱离本发明上述技术思想的情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，作出各种替换和变更，均应包括在本发明范围内。一种从发酵液中提取截短侧耳素的方法，包括以下步骤：1）采用菌种发酵法制备截短侧耳素，获得发酵液；2）向所述发酵液中加入甲醇或乙醇，获得混合发酵液，所述发酵液与甲醇或乙醇的体积比为5～25∶1；3）向步骤2）获得的混合发酵液中加入甲基叔丁基醚，所述混合发酵液与甲基叔丁基醚的体积比为2～20∶1，升温至30℃～55℃，搅拌后分离出溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚；4）将步骤3）中所述溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚在-0.06～-0.08MPa、40℃～50℃下浓缩，得到浓缩液；5）把步骤4）所获得的浓缩液降温至5℃～15℃，结晶分离出截短侧耳素。在实施例中，进一步对配比进行限定以达到优选的方式，即步骤2）中，所述发酵液和甲醇的体积比为10∶1；步骤3）中，所述混合发酵液与甲基叔丁基醚的体积比为5∶1。实施例中，作为优选，步骤3）中，所述升温的温度范围为45℃～50℃。步骤4）中，分离所述溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚时，采用具有回流装置的容器进行分离。实施例1：本发明中，要获取含有截短侧耳素的发酵液可以采用多种方法。《截短侧耳素产生菌的发酵培养基筛选和产物研究》（黄宇琪，西南大学硕士论文，2007-05-01）提到了多种可以产生截短侧耳素的菌种和发酵制备方法。本实施例采用截短侧耳素产生菌Clitoilusxa0passeckrianus发酵制备截短侧耳素发酵液,取发酵液5000ml（按截短侧耳素有效含量约2mg/ml计算）。向所述发酵液中按体积比5∶1加入甲醇获得混合发酵液，其过程中充分搅拌，使得截短侧耳素充分溶解。向所述混合发酵液中按体积比2∶1加入甲基叔丁基醚，使得截短侧耳素溶解在甲基叔丁基醚与甲醇的混合溶剂中。升温至30℃，充分搅拌，采用常规分离方法，分离出溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚。将所述溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚在-0.06MPa、40℃下浓缩，得到浓缩液，进一步将所述浓缩液降温至5℃，结晶分离出截短侧耳素9.02g，有效提取率约为90.2%。实施例2：xa0采用截短侧耳素产生菌Clitoilusxa0passeckrianus发酵制备截短侧耳素，取发酵液5000ml（按截短侧耳素有效含量约2mg/ml计算）。向所述发酵液中加入乙醇，发酵液与乙醇的体积比为25∶1。向所述混合发酵液中加入甲基叔丁基醚，使得截短侧耳素溶解在甲基叔丁基醚与乙醇的混合溶剂中，混合发酵液与甲基叔丁基醚的体积比为20∶1。再次加入同样量的甲基叔丁基醚，保温搅拌提取截短侧耳素，重复三次，合并所有提取截短侧耳素后的甲基叔丁基醚，升温至55℃，升温回流条件下分离出溶解了截短侧耳素后的甲基叔丁基醚。将所述溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚在-0.08MPa、50℃下回流浓缩，得到浓缩液，进一步将所述浓缩液降温至15℃，结晶分离出截短侧耳素9.37g，有效提取率约为93.7%。所得晶体在-0.07MPa真空下干燥碾碎，干燥温度为60℃，得到截短侧耳素原料粉末。实施例3：采用截短侧耳素产生菌Clitoilusxa0passeckrianus发酵制备截短侧耳素，取发酵液5000ml（按截短侧耳素有效含量约2mg/ml计算）。向所述发酵液中加入甲醇获得混合发酵液，发酵液与乙醇的体积比可以为5～25∶1，本实施例采用优选的10∶1。向所述混合发酵液中加入甲基叔丁基醚，使得截短侧耳素溶解在甲基叔丁基醚与乙醇的混合溶剂中，混合发酵液与甲基叔丁基醚的体积比可以为2～20∶1，本实施例采用优选的5∶1。再次加入同样量的甲基叔丁基醚，保温搅拌提取截短侧耳素，重复三次，以充分提取。合并所有提取截短侧耳素后的甲基叔丁基醚，升温至30～55℃，更好的是45℃～50℃，采用分液法分离出溶解了截短侧耳素后的甲基叔丁基醚。将所述溶解了截短侧耳素的甲基叔丁基醚在-0.07MPa、45℃下浓缩，得到浓缩液，进一步将所述浓缩液降温至15℃，结晶分离出截短侧耳素晶体9.56g，有效提取率约为95.6%。所得晶体在-0.05MPa真空下干燥碾碎，干燥温度为55℃，得到截短侧耳素原料粉末。